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        腫瘤標本液態與常規陽性對照制作方法對比
        發布時間:2020-02-17

          摘    要: 目的:探討免疫組化染色中陽性對照制作的方法及價值。方法:將本院的腫瘤標本進行不同制作方法的陽性對照,采用液態陽性對照設為觀察組,常規陽性對照設為常規組,每組腫瘤標本均進行36種免疫抗體染色,對比兩組每加1個對照耗時,假陰性發生情況。結果:觀察組每加1個對照耗時顯著短于常規組,假陰性發生率顯著低于常規組,上述對比均有統計學意義(P<0.05)。結論:免疫組化染色中采用液態陽性對照可縮短操作耗時,降低假陰性率,應用價值較高,可積極推廣。

          關鍵詞: 免疫組化陽性對照; 方法; 液態陽性對照;

          前言

          免疫組化為臨床病理診斷中常用技術,在各類病患的診治中免疫組化檢查往往用作最終確診依據,其質量、效率對臨床診療工作的開展中有巨大影響[1]。用經已證明含有待測抗原的組織,與待測樣本進行同樣處理后再通過免疫組化染色,結果應該為陽性,這一操作過程即為陽性對照,其主要目的在于證明靶抗原具有一定活性,通過陽性對照排除標本假陽性可能[2]。不過,目前常規免疫組化染色中陽性對照制作方法中由于載玻片質量原因,易出現假陰性,對臨床免疫組化檢查較為不利,為進一步提高臨床陽性對照效率及質量,本文利用我院腫瘤標本進行液態陽性對照與常規陽性對照的對比研究,以期為臨床免疫組化陽性對照制作方法提供參考意見,詳情如下。

          1、 資料及方法

          1.1、 一般資料

          對我院的腫瘤標本進行不同方法的陽性對照,免疫組化液態陽性對照及常規陽性對照均進行36種抗體染色,其中免疫組化液態陽性對照設為觀察組,常規陽性對照設為常規組。

          1.2、 方法

          常規組應用常規免疫組化陽性對照方法進行相關操作。

          觀察組進行免疫組化液態陽性對照,詳細操作如下。

          1.2.1、選擇已確定抗體陽性表達的腫瘤組織時,選擇細胞成分較多,纖維結締組織更少的腫瘤組織,若周圍纖維結締組織較多,先修去正常組織,留下腫瘤組織,若腫瘤組織較為分散同時又無其它更好陽性蠟塊,通過組織芯片方法采取,隨后集中包埋切片。

          1.2.2、切片時控制厚度為2~3um,將其放入50ml燒杯或者50ml的離心管內,使用玻璃棒輕輕碾碎,加入二甲苯后倒入50ml離心管內進行離心,轉速設置為2500r/min,持續3min后倒去二甲苯,再加無水酒精,輕輕搖晃混勻后再進行離心,完成后倒去無水酒精,根據沉淀物的多少加入75~100%的酒精,控制比例為1:30~50。1.2.3 75%100%
         

        腫瘤標本液態與常規陽性對照制作方法對比
         

          1.2.3、使用75%的酒精配置,避免使用100%酒精配置時細胞較散,干得過快,充分混勻后用10μL加樣槍于空白載玻片上滴2~3μL,待其干燥后再進行染色處理,若鏡下細胞較少,則再將懸浮液進行離心,吸去上層清液,若細胞過多,重疊現象嚴重則再加入適量霧無水乙醇。

          1.3 、觀察指標

          此兩種免疫組化陽性對照方法加每加1個對照所需耗時及假陰性發生情況。

          1.4、 統計學處理

          使用SPSS23.0軟件進行數據處理,表示計量資料,t檢驗,%表示計數資料,卡方檢驗,P<0.05有統計學意義。

          2、 結果

          2.1、 觀察組與常規組每加1個對照耗時對照

          觀察組每加1個對照耗時為1.69±0.12s,常規組每加1個對照耗時為3.59±1.02s,觀察組每加1個對照耗時顯著短于常規組(t=11.010,P=0.001)。

          2.2、 觀察組與常規組假陰性發生情況對照

          觀察組36種免疫抗體染色中出現假陰性0種,假陰性發生率為0.0%,常規組36種免疫抗體染色中出現假陰性4中,假陰性發生率為11.1%,觀察組假陰性發生率顯著低于常規組(χ2=11.752,P=0.001)。

          3 、討論

          免疫組織化學技術在病理診斷中起著重要的作用,其可幫助醫生精準有效地進行病理診斷,不過在提高病理診斷水平同時,也存在病理檢查結果不正確導致臨床出現誤診、漏診發生的問題。由于免疫組織化學在臨床診斷中往往被作為最終診斷依據,因此對于免疫組織化學質量控制對臨床診療工作的開展至關重要[3]。

          免疫組織化學陽性對照的主要目的在于明確待檢標本內的靶抗原表達為陽性,并排除假陽性可能,但常規免疫組化陽性對照工作量較大,操作麻煩,且受多種因素影響,無論機器或者手工均存在假陰性可能,易導致臨床免疫組織化學檢驗質量降低,誤診、漏診率升高[4,5]。

          此次研究所用液態組織陽性對照方法,其與常規對照不同在于采用組織切片或細胞切片的懸浮液進行染色對照,較常規陽性對照方法,其操作簡單,耗時短,一般1~2s即可加入1個對照,大大減輕了臨床工作人員的工作量,本次研究提示觀察組每加1個對照耗時顯著低于常規組(P<0.05),此外,液態陽性對照可有效控制假陰性發生,有效彌補常規陽性對照中假陰性過高的問題,本次研究中觀察組假陰性發生率顯著低于常規組(P<0.05)。在實際液態對照制作過程中需注意手工染色時需將其用DAKO筆圈入被檢組織范圍內,以防止被誤擦,且在最初使用時需先與醫生溝通,防止醫生將陽性對照當做被檢組織進行診斷,以免造成誤診。

          綜合所述,在免疫組化陽性對照的制作中,采用液態對照的制作方法可有效降低工作人員工作量,降低假陰性發生率,可積極推廣。

          參考文獻

          [1]高麗麗,劉春樣,朱長樂,等.多組織羊膜卷蠟塊在免疫組化染色陽性對照中的應用[J].臨床與實驗病理學雜志,2018,34(9):108-109.
          [2]柏永華,紀青.探討細胞塊切片免疫組化染色在胸腔積液診斷中的價值[J].中國繼續醫學教育, 2018, 10(30):95-97.
          [3]楊梅.特殊染色聯合免疫組化技術在腫瘤病理診斷中的效果及價值研究[J].基層醫學論壇,2017,21(19):2545-2546.
          [4] 趙文輝,張易青,于志敏.支氣管沖洗液細胞塊免疫組化染色對肺癌的病理診斷價值分析[J].心理醫生, 2017, 23(29):181-182.
          [5]李麗暉,許錦文.Glypican-3和CD34免疫組化染色在肝細胞癌與良性肝細胞性病變鑒別診斷中的價值[J].臨床醫學工程,2017(12):1707-1708.

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