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        消化道內鏡活檢標本石蠟切片的缺陷回顧
        發布時間:2019-12-05

          摘    要: 目的 探討消化道內鏡活檢標本石蠟切片制作過程中的常見問題,總結固定、取材、脫水、包埋、切片以及染色經驗,以提高消化道內鏡活檢標本石蠟切片的質量。方法 選取本院病理科2017年10月—2018年10月消化道內鏡活檢標本石蠟切片500例,采用回顧性分析方式,針對選取切片的質量缺陷、相關原因及其處理對策進行分析。結果 在選取的石蠟切片中,存在的質量缺陷有組織切片裂隙、褶皺、污染,組織切面不完整以及細胞核灰藍色等。結論 不斷規范消化道內鏡活檢標本石蠟切片制作過程中的各個操作環節,減少各種質量缺陷的產生,才能制得高質量的石蠟切片。

          關鍵詞: 消化道; 內鏡; 活檢; 石蠟切片; 制作; 病理;

          Abstract: Objective To investigate the common problems in the preparation of paraffin sections of gastrointestinal endoscopic biopsy specimens, and summarize the experience of fixation, sampling, dehydration, embedding, sectioning and staining, and improve the quality of paraffin sections of gastrointestinal endoscopic biopsy specimens. Methods 500 paraffin sections of digestive tract endoscopic biopsy specimens from October 2017 to October 2018 were retrospectively analyzed from the department of pathology of our hospital. The quality defects, related causes and countermeasures were analyzed. Results In the selected paraffin sections, there were some quality defects, such as section fissures, section folds, section contamination, incomplete cut surface and gray-blue nucleus. Conclusion The paraffin sections with high quality can only be prepared by constantly standardizing each operation step in the process of making paraffin sections of endoscopic biopsy specimens and reducing the occurrence of various quality defects.

          Keyword: digestive tract; endoscopy; biopsy; paraffin section; preparation; pathology;

          我國消化道腫瘤有極高的發病率,早發現、早診斷、早治療是降低死亡率的關鍵,隨著醫學技術的不斷發展,消化內鏡技術是當前診斷和篩查消化道腫瘤的最主要檢查手段,消化道內鏡活檢組織便成為了病理科最為常見的標本[1,2,3]。由于這種標本一般體積小、組織碎、數量少,又存在代表性差和因灼燒、擠壓導致細胞變形的可能,相對大標本增加了診斷難度,因此,更需要一張制作優良的組織切片。本文收集500例消化道內鏡活檢標本石蠟切片,對切片存在的質量缺陷進行回顧性分析,總結歸納制片經驗,旨在提高消化道內鏡活檢標本石蠟切片制作的質量,從而保證病理診斷的準確性。

          1、 資料與方法

          1.1、 一般資料

          我院病理科2017年10月—2018年10月期間接收的消化道內鏡活檢組織標本為1 495例,隨機選取500例標本作為研究對象,其中包括胃鏡238例和腸鏡262例,病理診斷結果有黏膜慢性炎、息肉、腺瘤、間質瘤、腺癌以及類癌等。
         

        激光雷達技術在輸電線路三維設計中的應用
         

          1.2、 方法

          病理常規石蠟切片質量優質標準:切面完整;薄厚均勻;無刀痕、裂隙;平坦無褶皺;無污染物;透明度良好;細胞核、質染色對比清晰;裱貼適當;標簽牢固編號清晰。根據此評分標準,對選取標本的石蠟切片在顯微鏡下進行觀察,記錄切片存在的質量缺陷,并分析其產生的相關原因,總結相應制片經驗。

          2、 結果

          在本文選取的500例石蠟切片中,存在質量缺陷的切片為93例,其中出現問題較多的是組織切片裂隙、切片有褶皺,分別為32例、27例;其次是組織切面不完整、細胞核呈灰藍色、組織切片有污染物,分別為13例、9例、7例;其他綜合問題5例。組織切片裂隙有的呈不規則狀、有的出現波紋狀、有的為起縱裂紋;在切片褶皺中,橫向褶皺居多,組織邊緣易于卷曲折疊;組織切面不完整表現為組織缺損、有空洞形成。

          3、 討論

          筆者認真分析了本文結果中主要質量缺陷出現的原因,有以下幾個方面:(1)裂隙原因:消化道內鏡活檢標本體積一般較小,容易處理過度,質地變硬變脆;冷凍溫度太低、冷凍時間太長,蠟塊變得過硬;刀片不鋒利,切片動作力度過大;攤片水溫太高,造成人為裂隙。(2)褶皺原因:由于組織脆小,取材時鑷子若夾取太緊,組織易受到機械壓迫;制備過程中蠟塊溫度過高或切片刀變鈍[4];攤片水溫過高或過低。(3)不完整原因:切片時用力過快過猛,組織中的小斑塊會從蠟塊中脫落,留下小空洞,尤其在過度處理的組織中容易發生;蠟塊粗修時,沒有暴露組織最大面,便急于切片、貼片。(4)細胞核灰藍原因:組織處理溫度過高、過熱,在石蠟的停留時間過長;或者固定時間太短,直接進行了高濃度的脫水處理[5]。(5)污染原因:取材臺面不干凈或取材器械沒及時沖洗,將污染物或上例標本碎小組織帶入;包埋時,把別的組織殘渣混入;切片刀有蠟屑、載玻片有污染、攤片水面不干凈,導致污染物粘附在切片上。

          鑒于上述原因,提示消化道內鏡活檢標本石蠟切片質量缺陷的產生主要和固定取材、脫水浸蠟、石蠟包埋、組織切片和HE染色這幾個制片環節密切相關,根據日常工作操作及查閱文獻復習,本文對其制作過程進行了相關經驗的總結,介紹如下:

          3.1、 固定取材

          組織固定是石蠟切片技術的重要環節,固定不及時或不徹底會影響以后的各個制片過程。組織離體后,內鏡醫師應及時將標本投入10%中性緩沖福爾馬林溶液固定,固定液的量應超過標本體積的10倍以上,根據標本大小,固定時間6~24 h為宜,固定溫度為正常室溫[6]。選擇廣口、有蓋及平底的固定容器,以利于夾取組織并保持其原形。由于消化道內鏡活檢標本一般體積較小或者帶有黏液,取材時要小心夾取,以防標本滑落丟失。微小組織(長徑小于0.3 cm)全部取材,并放在擦鏡紙上按四折疊法進行折疊[7],可滴加伊紅上色以便于包埋和切片;較大組織(如直徑大于0.5 cm的胃息肉、腸息肉等)可視其厚度剖開切面盡量全部取材,以防影響后面脫水質量。每取完一次標本,鑷子要沖洗干凈,以免之前標本的混入造成污染。當取材標本量多時,可先將取完的標本投入生理鹽水中,既能保持組織的結構,又能防止組織干涸[8,9]。

          3.2、 脫水浸蠟

          有條件的單位盡量選擇消化道內鏡活檢組織這類小標本與大標本分開處理的方式,以免造成小標本過度處理。脫水劑乙醇要保證從低濃度到高濃度的順序,低濃度乙醇對組織的處理很重要,如果前面先用到高濃度乙醇進行脫水,使組織表面先硬化形成屏障,難以使組織內部充分脫水,從而影響脫水質量[10]。為了節省成本,可以將脫水機前一個缸的乙醇倒掉,依次將后面乙醇梯度前移使用,但第一缸的乙醇應該保證80%的濃度。浸蠟溫度不應過高,一般設置為比熔點高2℃,使固體石蠟全部液化即可,浸蠟時間也不宜過長,以免組織過度處理變硬變脆或者影響后期細胞核著色[11]。要定期檢查乙醇、透明劑的濃度和石蠟的純度,注意及時更換。

          3.3 、石蠟包埋

          消化道內鏡活檢標本一般體積小、塊數多,包埋的關鍵是多塊組織能否包在同一個平面上,包埋的方向是否正確,包埋時可以注意以下幾個方面:(1)夾取組織的鑷尖部位應預熱,以防溫度過低造成碎小組織粘附在鑷子上不利于包埋。(2)包埋模具先注入一部分蠟液后移至冷凍臺上,待包埋模具底部形成一層蠟膜后,將組織移至模具再注入剩余蠟液,以利于多塊組織聚集在同一個平面。(3)多塊小組織包埋時,不要雜亂無章,應呈線狀排列為佳。(4)條索狀組織,平放包埋;片狀組織,豎起來包埋;小塊組織,以窄面朝下包埋。(5)當組織塊大小相差很大時,按照從大到小的順序包埋,使所有組織的最大切面在同一個平面上。另外,夾取組織時動作要輕柔,防止其彈出包埋盒,而且每包埋完一個標本,用軟布擦拭鑷子或者更換一把鑷子,以防碎小組織殘留造成污染。

          3.4、 組織切片

          切片前應該仔細檢查切片機上有關的螺旋是否擰緊,切片刀的切片角度是否合適。組織冷凍臺的溫度以-5℃為佳,冷凍數分鐘,不要冷凍時間過長,否則組織較硬,切片時易破碎[12]。攤片機的水溫以40℃~46℃為宜,以免水溫過高造成人為裂隙,并及時清理水面,以免殘留的碎屑污染下一例切片。切片刀的角度在5°左右為合適,切片時動作輕柔,速度均勻一致,切片厚度為3~4μm。切片刀應一直保持鋒利,可以在舊刀鋒位置上粗切蠟塊,暴露組織最大切面后,再換到新刀鋒位置上正式切片,以減少切片褶皺和刀痕。若切片的褶皺難于展平,可以先放入5%~10%的乙醇內在放入恒溫水中。每個蠟塊要求選取6~8個切面。此外,及時清掃切片機刀座上周圍的蠟屑,以防切片時造成污染和損傷刀片。

          3.5、 HE染色

          烤片時,溫度60℃~65℃為宜,時間20~30 min;對石蠟切片脫蠟要徹底并且及時更換脫蠟液,以免影響后期染色效果;注意觀察蘇木精染液的染色情況,若因其過氧化染色力明顯下降,應立即更換染液;控制好1%鹽酸酒精的分化時間,若處理時間過長,細胞核著色過淡。

          由于消化道內鏡活檢標本體積一般較小、石蠟制片步驟繁多,需要病理技術人員在固定、取材、脫水、包埋、切片以及染色等各個環節中認真對待小標本的特殊性,并在日常工作中發現問題、分析問題、總結相關經驗以及不斷規范制片過程,才能不斷提高消化道內鏡活檢標本石蠟切片的質量。

          參考文獻

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          [3]章歡,龔錦文.消化內鏡對消化道腫瘤的早期診斷治療價值分析[J].中國實用醫藥,2017,12(14):31-32.
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