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        新型冷臺干凍法制作病理切片的實踐
        發布時間:2019-10-08

          摘    要: 目的 探討如何提高常規病理切片質量的技術和方法,防止組織冷凍過度影響切片質量及蠟塊水分的進入。方法 收集2017年3月~12月南京市婦幼保健院病理科常規制片中的蠟塊4000個,每日選取類似的組織隨機平均分為兩組:濕凍法組共2000個蠟塊都使用傳統規范的冷臺冷凍法進行制片;干凍法組共2000個蠟塊,切片時都將蠟塊反過來進行冷臺冷凍法制片。對比兩組制片的效果及切片質量不良發生率。結果 干凍法組制片中各組織切片完整、厚薄均勻,無裂隙、皺褶且蠟塊組織表面無水分的進入。而濕凍法組中有一些組織切面不完整,有裂隙和顫痕,且切片的時候蠟塊組織表面易有水分的進入,蠟塊組織表面時有發白現象,尤其是以宮內物以及一些含血較多的組織比較明顯。干凍法組切片質量不良發生率低于濕凍法組(1.90%vs 7.80%),差異具有統計學意義(P<0.05)。結論 使用冷臺“干凍法”進行制片更好的提高了切片的質量,而且有效的避免了蠟塊組織水分的進入,保證了切片質量和蠟塊的保存。

          關鍵詞: 干凍法; 冷臺; 切片; 質量分析;

          Abstract: Objective To explore techniques and methods for improving the quality of conventional pathological sections to prevent tissue freezing from affecting the quality of the sections and the moisture ingress of the wax blocks. Methods A total of 4000 wax blocks were collected from the routine preparations of the Department of Pathology, Nanjing Maternal and Child Health Hospital from March to December 2017. The daily average of similar tissues was randomly divided into two groups: 2000 freezers were used. The traditional standard cold table freezing method is used for tableting; the dry freezing method group has a total of 2000 wax blocks, and the wax blocks are reversely processed for cold plate freezing. The effect of the two groups of tablets and the incidence of poor slice quality were compared. Results The tissue sections in the dry frozen method were intact, uniform in thickness, free of cracks, wrinkles and no moisture on the surface of the wax block. However, some tissues in the wet freezing method are incomplete, with cracks and trembling marks, and the surface of the wax block is easy to enter when the slice is formed, and the surface of the wax block is whitish, especially in the uterus. And some tissues with more blood are more obvious. The incidence of poor quality of the dry frozen group was lower than that of the wet frozen group (1.90% vs 7.80%) , the difference was statistically significant ( P<0.05) . Conclusion The use of cold table "dry freeze method" for tableting better improves the quality of the slice, and effectively avoids the entry of wax block tissue moisture, ensuring the quality of the slice and the preservation of the wax block.

          Keyword: Dry freezing method; Cold table; Slicing; Quality analysis;

          常規制片中脫完水的蠟塊要保存15~30年,尤其常規檢查后要進行其他的免疫及分子檢測,因此防止水分的再次進入是保證蠟塊完整性的前提[1]。有些組織在脫完水后,如后期有水分的進入,再次進行脫水必然會造成組織的破壞以及影響其他檢查,不能為臨床提供準確的檢查結果。為此,本研究嘗試一種新的冷臺干凍法進行制片,旨在證明其是否可以在提高制片質量的同時,也能有效防止水分進入蠟塊中的組織。

          1 、材料與方法

          1.1、 一般材料

          收集2017年3月~12月南京市婦幼保健院病理科常規制片中的蠟塊4000個,每日選取類似的組織采用隨機數字表法平均分為濕凍法組和干凍法組,每組2000個。
         

        新型冷臺干凍法制作病理切片的實踐
         

          1.2、 儀器

          萊卡手動2235切片機、普瑞斯星B型包埋機(PMB-B型冷臺)、配套的一次性羽毛刀片及Dako的coverstainer染封一體機等。

          1.3 、方法

          1.3.1、 濕凍法組

          采用傳統規范的冷臺冷凍法進行制片。將待切蠟塊先用舊刀初修至最大面,按順序擺放在冷臺上面,組織面朝下跟冷臺相接觸,待冷臺冷卻后再切片。

          1.3.2 、干凍法組

          采用新的干凍法。將待切蠟塊先用舊刀初修至最大面,按順序擺放在冷臺上面,組織面朝上,蠟塊背面與冷臺接觸,待冷臺冷卻后再切片。

          兩組蠟塊切片、烤片后進行常規染色, 二甲苯脫蠟, 梯度酒精洗二甲苯, 水洗, 蘇木素, 水洗, 返藍, 伊紅, 梯度酒精脫水, 二甲苯透明, 中性樹膠封固[2]。

          1.4、切片評價

          將兩組切片及蠟塊交由兩位不了解分組信息的病理醫生和高年資的技術員觀察, 然后按照江蘇省診斷和技術規范對其進行評價[3]。比較兩組各類標本切片質量發生情況 (切片不完整、顫痕、裂隙) 和切片質量不良發生率。

          1.5、 統計學方法

          應用SPSS 19.0統計軟件進行統計分析,計數資料以(n,%)表示,采用χ2檢驗。P<0.05為差異具有統計學意義。

          2、 結果

          干凍法組中,組織切面更平整,組織更完整,甚至有的組織更好切點,有效的提高了常規的切片質量,見圖1~圖4。本研究分別選取了婦產科常見的幾種不同的瘤體組織,包括宮頸、宮內膜、子宮肌瘤/腺肌瘤、含血多的組織(宮內物/輸卵管異位妊娠)等疾病組織,見表1。干凍法組中只出現了38例發生不同的組織部分不完整及顫痕、裂隙現象,發生率僅為1.90%;濕凍法組中有156例發生不同的組織不完整及顫痕、裂隙現象,發生率為7.80%。其中宮頸、宮內膜和含凝血塊多的組織發生切片質量不好的概率最高,干凍法組切片質量優于濕凍法組,差異有統計學意義(P<0.05)。

          圖1 含血宮內物切片
        圖1 含血宮內物切片

          圖2 宮內膜切片
        圖2 宮內膜切片

          圖3 子宮肌瘤切片
        圖3 子宮肌瘤切片

          圖4 宮頸切片
        圖4 宮頸切片

          表1 兩種不同冷凍方法切片的制片質量比較
        表1 兩種不同冷凍方法切片的制片質量比較

          3 、討論

          3.1 、常規石蠟切片的基本條件及注意事項

          (1) 做好準備工作:首先切片機、一次性刀片、冷臺等設備要一致且一次性刀片要及時更換,石蠟選擇相同品牌及熔點等,切片前要先打開冷臺預冷。 (2) 一定要把蠟塊初修好,再放在預冷好的冷臺上冷凍。 (3) 切片手法要熟練,技術員要熟練掌握機器的性能和切片方法,熟練掌握不同組織的切法和其他條件,只有不斷實踐才能逐步積累經驗。 (4) 石蠟切片時應根據組織的面不同實時調整蠟塊的切面及厚度,防止切片產生顫痕和切片不完整等現象。 (5) 要求病理取材醫師準確取材,對組織的大小、厚度等要控制好,并要求技術員認真仔細觀察不斷總結經驗才能制作出良好切片,保證制片質量。

          3.2 、影響組織切片質量的因素

          (1) 溫度:石蠟切片是利用冷臺降低組織蠟塊表面的溫度[4]切出完整的切片,再用溫差的表面張力進行漂片。但是冷凍時冷臺的溫度不能夠太低也不能太高,太低了組織冷凍過度導致組織過硬,過脆,切出的組織會有顫痕、裂隙或不全等現象。 (2) 固定:標本較大或組織脂肪較多沒有切開固定導致的固定不良,一般要提前把標本切開固定,延長固定時間。 (3) 取材:醫生取材時要根據具體要求來按照標準取材,一般為5 cm×4 cm×3 cm,不宜過大,不然組織脫水不夠會導致組織切不全。 (4) 脫水:脫水機試劑要定期更換,保證脫水試劑的濃度。 (5) 包埋:根據組織面不同包埋方向應一致,切片時組織牽拉的力度保持相同,不容易產生顫痕。 (6) 切片:根據組織不同調整切片厚度及方向,切片手法要熟練。 (7) 漂片:適當加大溫差,使組織漂片時容易展平。 (8) 染色封片:定期更換試劑,保證試劑濃度。紅藍對比適當,封片無溢膠、氣泡。

          決定組織切片質量優良的因素很多,除了以上所述,蠟塊表面的冷凍溫度是關鍵因素之一。通過將蠟塊反過來冷凍的干凍法制作的切片,本研究觀察發現在具體切片環節與傳統的濕凍法無明顯差異。經切片染色后,鏡下觀察細胞漿呈淡紅色,細胞核呈藍紫色,核漿對比分明,色澤鮮艷,無皺褶,組織結構完整、清晰,層次分明。其質量與傳統濕凍法組不相上下,甚至在某些方面勝過傳統的濕凍法組織切片。而新的干凍法中將蠟塊組織面朝上,使其組織面冷凍時不會冷凍過度,切片不易產生顫痕及裂隙[5],提高了組織切片的質量。而且冷臺上時間長了會有霜凝結,新的干凍法中可減少蠟塊中組織接觸水分,不易使組織變壞,保證了蠟塊長時間的保存。尤其是宮頸、肌瘤等組織本身組織纖維較多,冷凍過度會使蠟塊組織過硬,切時更容易發生顫痕現象。宮內膜及含血塊多的組織如果冷凍過度會導致組織切起來很脆[6],容易使組織腺體產生裂隙及組織不完整現象。新的干凍法中很好的避免了組織顫痕、腺體裂隙及組織不完整現象的產生,有效的提高了切片質量,保證了醫療質量,降低了醫生的診斷風險,保證了診斷的準確性。

          參考文獻

          [1] 陳潔.淺析臨床病理技術室常規出片前質量控制措施[J].醫院管理, 2017, 17 (77) :150-151.
          [2] 武巧伶, 魏春娥, 苗金紅.淺談HE染色方法在臨床病理診斷中的作用[J].中外醫學研究, 2013, 11 (29) :147.
          [3] 吳王飛, 陳迅, 程雪, 等.加熱法預防快速冷凍切片脫片的應用體會[J].醫學信息, 2015, 28 (7) :45-46.
          [4]范玲麗.病理制片質量控制的探討及體會[J].臨床與實驗病理學雜志, 2016, 32 (7) :823-824.
          [5] 陳嵐, 田燕曉, 劉一靖, 等.病理技術常規制片的問題幾解決方案[J].醫學理論與實踐, 2018, 31 (12) :1879-1880.
          [6]劉憲軍.病理制片質量控制的常見差錯及應對措施[J].中國當代醫藥, 2014, 21 (22) :148-149.

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